病毒载体构建包装

服务介绍

逆转录病毒构建及包装   

       逆转录病毒(Retrovirus)是一类RNA病毒。在逆转录酶的作用下,以病毒RNA为模板合成cDNA再通过DNA复制、转录、翻译等过程形成病毒颗粒。逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,由逆转录病毒载体、辅助载体(表达病毒包装需要的蛋白质)和包装细胞系组成。逆转录病毒载体在外源基因表达、基因沉默、基因治疗、生物制药等得到广泛的应用。逆转录病毒载体主要优点:转染范围广,可以感染各种细胞类型,转入的外源基因可完全融合,对细胞感染率高,感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。

      逆转录病毒载体系统共有两部分组成:包装细胞系和缺陷病毒本身。在逆转录病毒载体中,去除了正常的蛋白编码序列而保留了复制和包装信号,通过分子克隆技术将目的基因插入此载体上,而包装细胞系能提供病毒载体包装成病毒粒子所需的结构蛋白。当重组病毒载体导入包装细胞后,缺陷病毒载体和包装细胞的互补作用共同完成病毒装配,该病毒颗粒可感染其它宿主细胞,此时目的基因进入该细胞并整合到细胞基因组中,导致插入序列在宿主细胞中表达,产生目的蛋白。宿主细胞不能像包装细胞那样为缺失结构基因的逆转录病毒提供结构蛋白,因而在宿主细胞内不会产生新的感染性病毒颗粒,保证了该载体在生物制品领域的生物安全性问题。

      正茂医学的逆转录病毒载体构建及表达技术转染范围广,可以感染各种类型细胞;感染率高达100%。

逆转录病毒载体表达示意图

服务内容

     1.含目的基因的逆转录病毒载体的构建和纯化提取;

     2.逆转录病毒表达载体和辅助质粒共转染293T细胞;

     3.转染48 h后,收获逆转录病毒上清,移出上清,用滤膜过滤,或在4oC条件下以500 g离心5 min以除去活细胞;

     4.如果在1~2 h内使用逆转录病毒上清,将其放置在冰上,若时间间隔较长时,置于干冰上冰冻,而后转到-70oC储存;

     5.融化冰冻的上清,在37oC条件下加温片刻,立即使用。

服务说明

     1.客户提供:所需表达的外源基因名称或序列和所要选择的穿梭载体。

     2.服务周期:2周。

     3.若另有疑问欢迎致电本公司咨询,我们将竭诚为您服务。

质量承诺

     1.重组载体质粒;

     2.真实的原始实验数据;

     3.详细的实验步骤;

     4.权威的鉴定结果。